深度|外泌体裂解与未裂解的蛋白浓度差异比较报告
各位做外泌体的小伙伴最近经常问我,你们做外泌体提取后的蛋白检测需要用到裂解液吗?是怎么裂解的呢?有没有什么技巧?怎么做才能让每次的实验结果重复性更好呢?这里小编就把我们研发部门的原始资料拿出来给大家分享一下,希望能够帮助到您。
实验目的:
通过BCA法检测血清外泌体裂解与未裂解的蛋白浓度差异。
材料和仪器:
1:Exosome(3个不同来源的血清制备的外泌体)
2:外泌体蛋白专用裂解液(Umibio, UR60101)
3:酶标仪
4:BCA检测试剂盒
样本说明:
Group 1:A1-裂解后 B1-裂解前 (同一份外泌体,一分为二)
Group 2:A2-裂解后 B2-裂解前 (同一份外泌体,一分为二)
Group 3:A3-裂解后 B3-裂解前 (同一份外泌体,一分为二)
实验数据:
样品编号 | A1(裂解后) | A2(裂解后) | A3(裂解后) | B1(未裂解) | B2(未裂解) | B3(未裂解) |
OD值: | 2.699 | 3.504 | 3.175 | 3.966 | 4.721 | 4.518 |
相对OD值: | 2.613 | 3.418 | 3.089 | 3.880 | 4.635 | 4.432 |
计算浓度ng/uL | 2267.28 | 2965.39 | 2680.07 | 3366.04 | 4020.79 | 3844.74 |
稀释倍数 | 20 | 20 | 20 | 10 | 10 | 10 |
原始浓度ng/uL | 45345.53 | 59307.73 | 53601.44 | 33660.41 | 40207.90 | 38447.45 |
数据归一化处理:
数据处理 | 以未裂解作为对照组 |
Group 1 | 1.35 |
Group 2 | 1.48 |
Group 3 | 1.39 |
实验结果:
实验结论:
1:裂解后的血清外泌体蛋白浓度是裂解前的1.4倍左右;
2:为了获得准确的外泌体总蛋白量,建议裂解后再通过BCA法检测蛋白浓度。
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