外泌体技术服务

作为一家专业做外泌体的公司,外泌体提取一直是我们的强项。相关核心技术服务体系健全。

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  • 商品介绍
  • 规格参数
  • 外泌体技术服务

    服务介绍:


    外泌体是包含核酸和蛋白质的小囊泡(30-150 nm),是由各种各样的细胞分泌产生,在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。本产品是自主开发的外泌体快速提取试剂盒,经过优化处理适用于细胞培养上清液、血清、血浆、尿液和其他体液(脑脊液、腹水、羊水、乳液以及唾液等)中的外泌体提取,并搭配纯化过滤装置,可快速高效获得高纯度的外泌体颗粒。

     

     

    操作步骤示例:



    外泌体提取视频:

     

                


    样品名称

    细胞上清/尿液

    血清/血浆/精液

    脑脊液/腹水/羊水/乳液

    唾液

    样本量/

    V≤20 mL

    V≤2 mL

    V≤10 mL

    V≤5 mL


    检测服务介绍:


    1,  外泌体电镜检测:



    Electron-microscopic observation of HEK293 exosomes

     

    Electron-microscopic observation of HeLa exosomes



    血液外泌体电镜宇玫博试剂盒提取结果图


     


    细胞上清外泌体电镜宇玫博试剂盒提取结果图 


    2,  外泌体粒径检测:


     

    纳米颗粒跟踪分析(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA)

     

      

     3,  qPCR和Western blot检测:


     

    4,荧光素酶检测(LUC)

    4.1 启动子活性研究

    某些转录因子与其靶启动子中的特异序列结合,从而对基因的表达起抑制或增强的作用,荧光素酶报告基因实验(luciferase report assay)是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。

     

    4.2 基因3’UTR区和microRNA结合实验


    由于miRNA主要通过作用于靶基因的3’UTR起作用,可以将目的基因3’UTR区域构建至报告基因luciferase的后面, 通过比较过表达或者干扰miRNA后,报告基因表达的改变(监测荧光素酶的活性变化)可以定量反映miRNA对目的基因的抑制作用;结合定点基因突变等方法进一步确定miRNA与靶基因3’UTR的作用位点。



    应用案例:

          

    参考文献:


    Downregulation of miRNA-200c links breast cancer stem cells with normal stem cells. Cell. 2009 Aug 7;138(3):592-603. doi: 10.1016/j.cell.2009.07.011. [download]


    5,外泌体 microRNA 测序


    5.1:外泌体提取、纯化。

    5.2:建库+上机测序。

    5.3:基础数据分析。

    5.4:针对样品:肿瘤细胞上清液、血液(血清和血浆)等体液样本。

    外泌体miRNA 测序 外泌体抽提 1个样所需最小体积 :

    血清 血浆: 2ml 3

    肿瘤细胞上清: 60ml 3

    干细胞 原代细胞上清: 120ml

    其他体液:体积待定


    6,蛋白质组学


    技术方法

    仪器

    说明

    Itraq/TMT

    Q-Exactive Plus

    10馏分,1h机时。血高丰度蛋白去除加收1500/样品(sigma   IGY14)。iTraq有4标和8标两种;TMT有6标和10标两种。

    DIA

    Fusion(Lumos)

    适用:个体差异大,且样本数量较多的项目。(如临床样本,临床样本每组不少于10例)

    Label Free

    Q-Exactive Plus

    蛋白质非标定量

    蛋白定性

    Q-Exactive Plus

    一般适用于IP/Co-IP后复杂程度较低的溶液(或SDS-PAGE)样本。

    非靶代谢

    Q-TOF

    检测代谢物,每组重复数不少于6个


    7,外泌体荧光标记服务


    7.1 技术简介

    通过对分离的外泌体进行体外荧光标记示踪,可以将荧光标记的外泌体用于功能学研究(细胞共孵育实验或者动物活体成像实验)。目前对于外泌体的标记方法有很多种,主要是通过亲脂性的染料:PKH-67(green)/PKH-26(red),这些染料可以稳定的与外泌体的膜脂质区结合并发出荧光,可以用于外泌体的功能学研究。


    7.2 实验流程


                                                 


    7.3 服务说明及结果


    客户提供:外泌体或由我司分离外泌体。


    公司提供:染色好的外泌体、基本实验步骤、图片、数据分析结果。


    实验周期:5-10个工作日。


    服务案例下载:不同剂量的荧光染料对外泌体的标记效率的影响研究

     

    7.4 参考文献


    1   Adipose Tissue Macrophage-Derived Exosomal miRNAs Can Modulate In Vivo and In Vitro Insulin Sensitivity. Cell 2017 Oct;171 (2): 372-384.e12.


    2   Exosomes facilitate therapeutic targeting of oncogenic KRAS in pancreatic cancer, Nature 2017 June volume 546, pages 498–503