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外泌体技术服务
服务介绍：
外泌体是包含核酸和蛋白质的小囊泡（30-150 nm），是由各种各样的细胞分泌产生，在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。本产品是自主开发的外泌体快速提取试剂盒，经过优化处理适用于细胞培养上清液、血清、血浆、尿液和其他体液（脑脊液、腹水、羊水、乳液以及唾液等）中的外泌体提取，并搭配纯化过滤装置，可快速高效获得高纯度的外泌体颗粒。
操作步骤示例：
外泌体提取视频：
样品名称
细胞上清/尿液
血清/血浆/精液
脑脊液/腹水/羊水/乳液
唾液
样本量/样
V≤20 mL
V≤2 mL
V≤10 mL
V≤5 mL
检测服务介绍：
1, 外泌体电镜检测：
Electron-microscopic observation of HEK293 exosomes
Electron-microscopic observation of HeLa exosomes
血液外泌体电镜宇玫博试剂盒提取结果图
细胞上清外泌体电镜宇玫博试剂盒提取结果图
2, 外泌体粒径检测：
纳米颗粒跟踪分析（Nanoparticle Tracking Analysis，NTA）
3, qPCR和Western blot检测：
4，荧光素酶检测（LUC）
4.1 启动子活性研究
某些转录因子与其靶启动子中的特异序列结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用，荧光素酶报告基因实验（luciferase report assay）是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。
4.2 基因3’UTR区和microRNA结合实验
由于miRNA主要通过作用于靶基因的3’UTR起作用，可以将目的基因3’UTR区域构建至报告基因luciferase的后面， 通过比较过表达或者干扰miRNA后，报告基因表达的改变（监测荧光素酶的活性变化）可以定量反映miRNA对目的基因的抑制作用；结合定点基因突变等方法进一步确定miRNA与靶基因3’UTR的作用位点。
应用案例：
参考文献：
Downregulation of miRNA-200c links breast cancer stem cells with normal stem cells. Cell. 2009 Aug 7;138(3):592-603. doi: 10.1016/j.cell.2009.07.011. [download]
5，外泌体 microRNA 测序
5.1：外泌体提取、纯化。
5.2：建库+上机测序。
5.3：基础数据分析。
5.4：针对样品：肿瘤细胞上清液、血液（血清和血浆）等体液样本。
外泌体miRNA 测序 外泌体抽提 1个样所需最小体积 ：
血清 血浆： 2ml 3
肿瘤细胞上清： 60ml 3
干细胞 原代细胞上清： 120ml
其他体液：体积待定
6，蛋白质组学
技术方法
仪器
说明
Itraq/TMT
Q-Exactive Plus
10馏分,1h机时。血高丰度蛋白去除加收1500/样品（sigma IGY14）。iTraq有4标和8标两种；TMT有6标和10标两种。
DIA
Fusion(Lumos)
适用：个体差异大，且样本数量较多的项目。（如临床样本，临床样本每组不少于10例）
Label Free
Q-Exactive Plus
蛋白质非标定量
蛋白定性
Q-Exactive Plus
一般适用于IP/Co-IP后复杂程度较低的溶液（或SDS-PAGE）样本。
非靶代谢
Q-TOF
检测代谢物，每组重复数不少于6个
7，外泌体荧光标记服务
7.1 技术简介
通过对分离的外泌体进行体外荧光标记示踪，可以将荧光标记的外泌体用于功能学研究（细胞共孵育实验或者动物活体成像实验）。目前对于外泌体的标记方法有很多种，主要是通过亲脂性的染料：PKH-67（green）/PKH-26（red），这些染料可以稳定的与外泌体的膜脂质区结合并发出荧光，可以用于外泌体的功能学研究。
7.2 实验流程
7.3 服务说明及结果
客户提供：外泌体或由我司分离外泌体。
公司提供：染色好的外泌体、基本实验步骤、图片、数据分析结果。
实验周期：5-10个工作日。
服务案例下载：不同剂量的荧光染料对外泌体的标记效率的影响研究
7.4 参考文献
1 Adipose Tissue Macrophage-Derived Exosomal miRNAs Can Modulate In Vivo and In Vitro Insulin Sensitivity. Cell 2017 Oct;171 (2): 372-384.e12.
2 Exosomes facilitate therapeutic targeting of oncogenic KRAS in pancreatic cancer, Nature 2017 June volume 546, pages 498–503