植物外泌体提取操作实验报告-葡萄篇

 

植物外泌体研究越来越多,很多客户问,如何提取植物外泌体,我们以葡萄为例,给您做一下详细解读。

 

首先,葡萄外泌体应用广泛:

 

1)医疗和健康领域

外泌体是一种纳米级的细胞外囊泡,能够携带蛋白质、脂质和核酸等生物分子。葡萄外泌体具有天然生物活性,以下是其在医疗和健康领域的潜在应用:

药物递送: 由于外泌体具有良好的生物相容性和低免疫原性,它们可以作为药物递送系统,用于携带抗癌药物、抗炎药物等,增强药物的靶向性和疗效。

疾病诊断: 外泌体中包含的生物分子可以作为疾病生物标志物,用于早期诊断和监测疾病进程。

再生医学: 外泌体可以促进细胞再生和修复,应用于组织工程和再生医学领域。

 

2)美容与护肤

葡萄外泌体富含抗氧化成分,如白藜芦醇、维生素C等,可以用于开发高效的美容和护肤产品。

抗衰老: 外泌体能够促进皮肤细胞的再生和修复,延缓皮肤衰老,减少皱纹。

美白和保湿: 外泌体中含有的活性成分可以美白皮肤,提升皮肤的水润度和弹性。

 

3)营养补充

葡萄本身就是一种营养丰富的水果,其提取的外泌体可以用于开发功能性食品,提供额外的健康益处。

抗氧化: 外泌体中富含抗氧化物质,有助于中和自由基,减少氧化应激对身体的损害。

免疫调节: 外泌体可以调节免疫系统,提高身体的免疫力,预防疾病。

 

4)农业和食品工业

葡萄外泌体可以用于农业和食品工业,提升产品的附加值。

植物生长促进剂: 外泌体可以作为天然的植物生长促进剂,增强作物的抗病性和生长速度。

食品添加剂: 外泌体中的抗氧化成分和其他生物活性物质可以作为食品添加剂,延长食品的保质期,提高食品的营养价值。

 

5)环境保护

使用天然来源的外泌体,有助于减少化学合成药物和添加剂的使用,降低环境污染,促进可持续发展。

其次,植物外泌体提取技术挑战与前景:

虽然从葡萄中提取外泌体具有广泛的应用前景,但也面临一些技术挑战,如提取工艺的复杂性、纯度和活性的保证等。未来,随着技术的进步和研究的深入,葡萄外泌体的应用将更加广泛和成熟。

总之,从葡萄中提取外泌体不仅具有丰富的研究和应用价值,而且在多个领域展现出巨大的潜力。

 

附:实验报告

概述:利用榨汁、离心、除杂、滤膜过滤和外泌体提取纯化试剂盒-柱纯法(细胞上清)获取活性葡萄外泌体。

 

实验材料:

2.1  器材:榨汁机(九阳Z8-V82)、离心机、外泌取提取纯化试剂盒-柱纯法(细胞上清)-UR52172、100 KD超滤柱

2.2  试剂:84、0.5mol/L NaOH溶液、0.9%NaCl溶液

2.3  原材料:品种:克伦生无籽红提   产地:山东

操作步骤:

3.1 原料清洗及消毒

①原材料超声波清洗;

②84消毒液按瓜果蔬菜推荐稀释比1:29用纯化水进行稀释,配置消毒液浸泡葡萄20min;

③浸泡至纯化水中;

④将葡萄去蒂,并以纯化水清洗,至表面无滑腻感,实际清洗4遍;

 

 

3.2 原料榨汁

①将葡萄放入榨汁机(九阳Z8-V82),50转/min榨汁;

②榨汁约20 min,收集果汁。

 

汁渣分离式榨汁

 

3.3  两步离心除杂(低速、高速)

① 4℃ 5000 rpm/min,离心20 min,收集离心后上清;

 

离心前

 

离心后

 

② 4℃ 10000 rpm/min离心30 min,收集离心后上清。

 

离心前

 

离心后

 

3.4  滤膜过滤

0.45μm滤膜过滤,收集滤液。

3.5  pH调至中性后高速离心

① 原葡萄汁pH在3~4,呈酸性,使用NaOH将pH调至中性7.01,汁液由不澄清的淡红色变至半澄清的淡黄色,并出现絮状沉淀(本次为测试使用,后续将使用碳酸氢钠和柠檬酸进行pH调节);

 

pH调至中性后

 

② 4℃ 10000 rpm/min离心20 min,收集离心后上清。

3.6  滤膜过滤

① 0.45μm滤膜过滤;

② 0.22μm滤膜过滤。

 

过滤膜后

 

3.7  外泌体提取

使用外泌取提纯化试剂盒-柱纯法(细胞上清)。点击查看产品详情

①按说明书要求提前准备好提取柱;

②过柱:将经0.45 μm或0.22 μm过滤器过滤后的葡萄汁液沿柱子内壁缓慢多次加入提取柱中,待葡萄汁液自然流尽;

③平衡:葡萄汁液流尽后沿柱子内壁缓慢多次加入15 mL Solution B溶液,待Solution B溶液自然流尽;

④洗杂:Solution B溶液流尽后沿柱子内壁缓慢加入 0.8 mL Solution C溶液,待Solution C溶液自然流尽;

⑤洗脱:待上步骤中Solution C溶液流尽后沿柱子内壁再次缓慢加入1 mL Solution C溶液,收集该流穿液(该流穿液中富含外泌体颗粒);

⑥浓缩:用100 KD超滤柱将流穿液适当浓缩;

⑦纯化外泌体:将收获的外泌体颗粒粗品转入Exosome Purification Filter(EPF柱)上室中, 4℃ 6200 rpm离心10 min,离心后收集EPF柱

 

浓缩纯化后的成品

 

3.8分装、送检及保存

① 取样品送检;

② 其余分装后-80℃封口保存。

相关数据收集和检测:

样本名称
BCA蛋白浓度(ng/μL)
葡萄提取物-Exosome
4881.86

 

 

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